罗氏地高辛(DIG)系统产品选择指南

罗氏应用科学部（Roche Applied Science）是最早致力于向用户提供非放射标记技术的公司之一，让更多的科研工作者们可以避免使用危险的放射性同位素。自1995年德国宝灵曼公司的地高辛产品上市以来，尽管陆续有许多出色的竞争者涉足这一领域，尽管有定量PCR技术的应用，DIG系统仍然是非放射性高效标记—检测技术的首选，被广泛地应用各种膜杂交及原位杂交技术中。不久，德国宝灵曼公司的地高辛系列产品被罗氏收购。地高辛产品现在罗氏应用科学部生产与销售。

技术原理：
地高辛标记技术源于一种从洋地黄类植物（毛地黄和毛花毛地黄）中提取的类固醇（Steroid）物质—— Digoxigenin （DIG），在医学上可用于治疗各种急性和慢性心功能不全以及室上性心动过速、心房颤动和扑动等疾病。由于洋地黄植物的花和叶片Digoxigenin在自然界中的唯一来源，因此抗DIG的抗体不会与其他的生物物质结合，从而可以满足特异性标记的需要。这一点，正是DIG胜于生物素(Biotin)的地方——同样是小分子标记物，生物素广泛存在于各种组织中，对于灵敏度很高的标记检测实验来说，样品自身含有的内源生物素，就会对结果产生干扰。地高辛就能够很好地避免这个问题。

技术特点：
与放射性标记和检测技术相比较，DIG 系统具有一下多个优势：
ü高灵敏度，完全可满足实验需要，某些方面甚至可与放射性标记的灵敏度向媲美
ü曝光时间短，结果显示时间以分钟计算，无需几小时甚至几天的自显影过程
ü安全环保，不接触放射性物质，不会对环境造成污染
ü探针可重复使用，最少可以稳定储存一年
ü可轻松进行探针拨离和重探
ü凭借多年的经验和众多使用者的反馈意见，提供全面的应用指南

应用领域：
地高辛系统能够安全高效地标记DNA, RNA或是寡聚核苷酸探针，这些探针可以被广泛地应用在
üSouthern blotting, dot blotting
üNorthern blotting
üArray
üColony hybridization
üIn situ hybridization
üELISA

技术细节：

DIG 通过一个含有11个碳原子的空间臂与尿嘧啶核苷酸上的C5位置相连，一定浓度的DIG标记的核苷酸可以通过DNA polymerase (如E.coli DNA Polymerase, T4 DNA Polymerase, T7 DNA Polymerase, Reverse Transcriptase, Taq DNA Polymerase ）、RNA polymerase (如SP6, T3或T7 RNA Polymerase)或是末端转移酶（Terminal Transferase）的作用掺入到核苷酸探针中；也可通过随即引物标记（random primed labeling）, 缺口平移（nick translation），PCR，3’端标记/加尾或是体外转录制备带有DIG标记的探针。当然也可以通过化学合成的方法进行核苷酸的标记。

对于DIG 标记探针的杂交检测，可选用连接有碱性磷酸酶（alkaline phosphatase），过氧化物酶(peroxidase),荧光素（fluorescein）,若丹明（rhodamine）或是胶体金（colloidal gold）高亲和性的抗DIG抗体共轭物；也可选用不带任何共轭连接的抗DIG抗体和二级抗体。
检测的灵敏度主要依赖于对不同抗DIG抗体共轭物显示方法的选择。以连接有碱性磷酸酶的抗DIG 抗体为例：即可以使用NBT或BCIP做底物的显色法，也可以使用HNPP荧光碱性磷酸酶底物，检测的灵敏度常规可达到0.1pg (Souther blot)。

名称	编号	产地	规格	价格￥
DIG DNA Labeling and Detection Kit 地高辛DNA标记和检测试剂盒	11093657910	Roche	Kit	7795
	DIG-11-dUTP随机引物法标记DNA, 碱性磷酸酶(AP)生色反应检测, 标记探针用于Southern、Northern和斑点杂交以及菌落和噬菌体筛选。组成: 未标记对照DNA1; 未标记对照DNA2; DNA稀释液; DIG-标记对照DNA; 六核苷酸混合物; Klenow 2u/μl; 封闭液; BCIP/NBT; 10×dNTP标记混合物; 抗-地高辛-碱性磷酸酶复合物。一个Kit可用于25次标记反应和50次检测(100cm²膜), -20℃保存。
DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I 高效DNA地高辛标记和检测试剂盒I	11745832910	Roche	Kit	4872
	比普通DIG随机引物法标记效率高, 操作简单, 可用于Southern、Northern和斑点杂交以及菌落和噬菌体筛选。一个Kit可用于12次标记反应和24次检测反应。组成: 5×DIG-高效标记试剂; 未标记对照DNA, PBR328; DNA稀释液; 抗-DIG-碱性磷酸酶复合物; NBT/BCIP储存液; 10×封闭液; DIG定量复试纸条; DIG对照试纸条, -20℃保存。
DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II 高效DNA地高辛标记和检测试剂盒II	11585614910	Roche	Kit	4998
	比普通DIG随机引物法标记效率高, 采用CSPD化学发光检测灵敏度更高。一个Kit可用于12次标记反应和24次检测反应。组成: 5×高效DIG标记复合物; 未标记对照DNA, PBR328; DNA稀释液; 抗-DIG-碱性磷酸酶连接物; CSPD; 10×封闭液; DIG定量试纸条; DIG对照试纸条, NBT/BCIP储存液; -20℃保存。
DIG DNA Labeling Kit 地高辛DNA标记试剂盒	11175033910	Roche	40T	6922
	随机引物扩增法以DIG-11-dUTP标记DNA; DIG标记探针可用于各种膜杂交。
DIG Nucleic acid Detection Kit 地高辛核酸检测试剂盒	11175041910	Roche	Kit	4612
	NBT/BCIP显色法检测, 灵敏度可达0.1pg同源DNA; 可检测40张100cm²杂交膜。-20℃保存。
DIG Oligonucleotide 3’-End Labeling Kit 寡核苷酸3’末端地高辛标记试剂盒	3353575910	Roche	25T	6636
	通过末端转移酶以DIG-11-ddUTP标记14-100bp的寡核苷酸探针3’端用于各种膜杂交和原位杂交。每个反应可标记100pmol的寡聚核苷酸。
DIG Oligonucleotide Tailing Kit 寡核苷酸加尾地高辛标记试剂盒	3353583910	Roche	25 T	5594
	通过末端转移酶以DIG-11-ddUTP在寡核苷酸探针3’端加一平均长度50bp(10-100bp)的寡核苷酸, 用于DNA/RNA膜杂交和原位杂交。每个反应可标记100pmol的寡聚核苷酸。
DIG RNA Labeling Kit (SP6/T7) 地高辛RNA标记试剂盒(SP6/T7)	11175025910	Roche	2´10T	6779
	由SP6或T₇ RNA聚合酶通过转录反应过程标记RNA, 1mg模板可产生约10mg标记RNA用于杂交。-20℃保存。组成: pSPT18 DNA, pSPT19 DNA, 对照DNA1, 对照DNA2, DIG标记对照RNA, NTR标记混合物, 转录缓冲液, RNase抑制剂, 无RNase的DNase I, SP6 RNA聚合酶, T7 RNA聚合酶。
PCR DIG Probe Synthesis Kit PCR地高辛探针合成试剂盒	11636090910	Roche	25T	3200
	标记的探针可在Southern杂交后从5-10mg的人基因组DNA检测出单拷贝基因, 是从少量DNA模板制备大量探针的最有效、最经济的方法。
DIG Northern Starter Kit	12039672910	Roche	10T	4511
	包含标记DIG RNA及进行Northern印迹的所有必需试剂, 配合DIG Wash and Block Buffer Set方便进行Northern印迹; 能作10个标记反应及10次检测(100mm²膜)。特别适合初用者使用; 标记混合物经最优化, 配合提供的化学发光底物CDP-Star, 能产生最高的灵敏度。
DIG Luminescent Detection Kit 地高辛发光检测试剂盒	11363514910	Roche	Kit	5023
	CSPD化学发光法检测, 灵敏度可达0.03pg同源DNA; 可检测50张100cm²杂交膜。
DIG High Prime 高效地高辛DNA标记试剂	11585606910	Roche	40T	3100
	标记DNA探针, 只需一步操作, 标记效率较通常随机引物法高3倍。40T

根据标记方法选择探针

标记DNA探针

货号	货名	规格	方法	说明
11745816910	DIG-Nick Translation Mix	160 µl，40次标记反应	缺口平移法	此方法标记的探针可以控制探针长度，一般多用于原位杂交
11745832910	DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I	12次标记反应，24次杂交检测	随机引物法	集标记、封闭、杂交和检测于一体的试剂盒（显色法，底物为NBT/BCIP)，应用于Southern、Northern、dot及菌斑杂交
11585614910	DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit Ⅱ	12次标记反应，24次杂交检测	随机引物法	同上述Kit I相似，区别在于化学发光法检测，底物为CSPD
11585550910	PCR DIG Labeling Mix	500ul，50次标记反应（100ul终体积）	PCR扩增法	此法适用于模板量少或质量不够高的情况，包含dNTPs和DIG-11-dUTP，多用于dot blot

标记RNA探针

货号	货名	规格	方法	说明
11209256910	Digoxigenin-11-UTP	25 µl 250 nmol (10 mM)	转录标记法	DIG标记的尿嘧啶核苷三磷酸，用于标记RNA
03359247910	Digoxigenin-11-UTP	57 µl 200 nmol (3.5 mM)		DIG标记的尿嘧啶核苷三磷酸，用于标记RNA
11277073910	DIG RNA Labeling Mix, 10×	40 µl，20次标记反应		包含NTPs及DIG-11-UTP
11175025910	DIG RNA Labeling Kit (SP6/T7)	20次标记反应		通过SP6, T7 RNA聚合酶将DIG-11-UTP掺入到转录的RNA中，应用于Southern、Northern、原位及菌斑杂交
12039672910	DIG-Northern Starter Kit	10次标记反应，10次杂交检测		以线性的DNA为模板，通过SP6, T7或是T3 RNA聚合酶将DIG-11-UTP掺入到转录的RNA中，借助化学发光底物CDP-Star检测，用于Northern杂交

标记寡核苷酸探针

货号	货名	规格	方法	说明
11333054001	Digoxigenin-3-O-methylcarbonyl-ε-aminocaproic acid-N-hydroxysuccinimide ester	5 mg	5’-末端标记法	用于蛋白质或寡核苷酸的DIG标记
3353583910	DIG Oligonucleotide Tailing Kit, 2^nd generation	25次	3’-末端标记法	用于膜杂交或原位杂交
3353591910	DIG Gel Shift Kit, 2nd generation New formulation containing Terminal Transferase, recombinant	20次标记反应、200次结合反应、20次杂交检测及20次对照反应	3’-末端标记法	用于凝胶迁移分析EMSA实验，检测DNA-蛋白质复合物

根据实验方法选择产品

Southern blotting

货号	货名	规格	方法	说明
11745832910	DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I	12次标记反应，24次杂交检测	随机引物法	集标记、封闭、杂交和检测于一体的试剂盒（显色法，底物为NBT/BCIP)，应用于Southern、Northern、dot及菌斑杂交
11585614910	DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit Ⅱ	12次标记反应，24次杂交检测	随机引物法	同上述Kit I相似，区别在于化学发光法检测，底物为CSPD
11585550910	PCR DIG Labeling Mix	500ul，50次标记反应（100ul终体积）	PCR扩增法	此法适用于模板量少或质量不够高的情况，包含dNTPs和DIG-11-dUTP，多用于dot blot
3353583910	DIG Oligonucleotide Tailing Kit, 2^ndgeneration	25次	3’-末端标记法	用于膜杂交或原位杂交

Northern blotting

货号	货名	规格	方法	说明
11175025910	DIG RNA Labeling Kit (SP6/T7)	20次标记反应	转录标记法	通过SP6, T7 RNA聚合酶将DIG-11-UTP掺入到转录的RNA中，应用于Southern、Northern、原位及菌斑杂交
12039672910	DIG-Northern Starter Kit	10次标记反应，10次杂交检测	转录标记法	以线性的DNA为模板，通过SP6, T7或是T3 RNA聚合酶将DIG-11-UTP掺入到转录的RNA中，借助化学发光底物CDP-Star检测，用于Northern杂交
3353583910	DIG Oligonucleotide Tailing Kit, 2^nd generation	25次	3’-末端标记法	用于膜杂交或原位杂交

Colony and plaque hybridization

货号	货名	规格	方法	说明
11585550910	PCR DIG Labeling Mix	500ul，50次标记反应（100ul终体积）	PCR扩增法	此法适用于模板量少或质量不够高的情况，包含dNTPs和DIG-11-dUTP，多用于dot blot

In situ hybridization

货号	货名	规格	方法	说明
11745816910	DIG-Nick Translation Mix	160 µl，40次标记反应	缺口平移法	此方法标记的探针可以控制探针长度，一般多用于原位杂交
11585550910	PCR DIG Labeling Mix	500ul，50次标记反应（100ul终体积）	PCR扩增法	此法适用于模板量少或质量不够高的情况，包含dNTPs和DIG-11-dUTP
3353583910	DIG Oligonucleotide Tailing Kit, 2^nd generation	25次	3’-末端标记法	用于膜杂交或原位杂交
11175025910	DIG RNA Labeling Kit (SP6/T7)	20次标记反应	转录标记法	通过SP6, T7 RNA聚合酶将DIG-11-UTP掺入到转录的RNA中，应用于Southern、Northern、原位及菌斑杂交

ELISA

货号	货名	规格	方法	说明
11636120910	PCR ELISA, DIG-Labeling	50次标记反应	PCR扩增法	用于标记带DIG的PCR产物
11636111910	PCR ELISA, DIG-Detection	192次检测反应	PCR扩增法	用于检测DIG标记的PCR产物

根据检测方法选择产品

灵敏度更高的化学发光法

货号	货名	规格
12041677001	CDP-Star，即用	2 x 50 ml
11755633001	CSPD，即用	2 x 50 ml
12039672910	DIG-Northern Starter Kit	10次标记反应，10次杂交检测
11585614910	DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit Ⅱ	12次标记反应，24次杂交检测

方便直观的显色法

货号	货名	规格
11442074001	BM Purple AP Substrate	100 ml
11681451001	NBT/BCIP Stock Solution	8ml
11496549001	Fast Red Tablets	20 tablets
11745832910	DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I	12次标记反应，24次杂交检测