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如何正确选择二抗 二抗选择指南
发布时间:2013-7-8
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 以下指南将帮助您选择最适合该应用的二抗。

常见问题

1.一抗的宿主物种是什么?

2.需要了解哪些有关一抗同型的内容?

3.需要酶学或荧光检测吗?

4.是否需要预吸附的二抗?

5.是否需要亲和纯化的抗体或 IgG 片段?

6.有必要使用 F(ab) F(ab)2 片段抗体吗?

7.是否需要抗 IgG 重链和轻链、抗轻链或抗 F(ab)2二抗? 

1. 一抗的宿主物种是什么?二抗指向一抗的物种。如果使用来源于兔的一抗,则需要来源于 除兔以外的其它物种的抗兔二抗。例如山羊多克隆抗兔IgG - H&L (HRP) 二抗 (ab6721) 可以 检测兔多克隆抗 Ki67 一抗 (ab15580) 

2. 需要了解哪些有关一抗同型的内容?二抗必须指向一抗同型。

多克隆一抗通常来源于兔、山羊、绵羊或驴,并且是IgG 同型。二抗通常为抗 IgG 重链和轻 链的抗体。 单克隆一抗通常来源于小鼠、兔和大鼠。例如,如果单克隆一抗为小鼠 IgG1,则 需要抗小鼠 IgG 或特异性较低的 F(ab) 片段抗小鼠 IgG。 人免疫球蛋白类、亚类、型和亚型:

•类或同型:IgG (γ heavy chains), IgM (μ), IgA (α), IgE (ε), IgD (δ)

•亚类: IgG1 (γ1 heavy chains), IgG2 (γ2), IgG3 (γ3), IgG4 (γ4); IgA1 (α1),

IgA2 (α2)

•型:κ light chain, λ light chain

•亚型: λ1, λ2, λ3, λ4

其它类型的反应:

•多价抗体与所有免疫球蛋白类反应

•抗 Fc 或重链 (α, δ, ε, γ, and μ) 抗体仅与重链反应

•抗 F(ab) 或完整分子抗体与重链和轻链反应,而与免疫球蛋白类无关

•由于所有免疫球蛋白类均使用相同的 κ 和 λ 轻链,因此抗轻链(κ 和 λ)抗体 与所有

免疫球蛋白类反应 

3. 需要酶学或荧光检测吗?偶联类型是依赖于应用的。

对于酶学和生物素检测,例如,在 WB ELISA 中,建议将二抗偶联于 HRP, AP 或 生物素 。不论抗体宿主物种是什麽,抗生物素蛋白和链霉亲和素与生物素的结合 作用均很强,并且 均能使信号放大。 如果使用了激光,例如,在流式细胞术、ICC/IF IHC 中使用时,则建议将二抗偶 联于荧 光染料进行荧光检测。访问我们 荧光染料指南,为您的实验选择染料。

Learn more about the 查看更多关于使用DyLight ®荧光染料的特性与优点. 

4. 是否需要预吸附的二抗?对于富含免疫球蛋白的组织和细胞,通常推荐使用预吸附血清的 二抗于蛋白质印 迹应用。预吸附的二抗与内源免疫球蛋白发生相互作用的可能性较低,因此 可降 低非特异性背景。二抗进行预吸附时,预吸附样品应来源于与检测样品相同的物 种。例 如,在人组织中检测时,将需要人预吸附抗体。

查看更多关于DyLight ®预吸附二抗的信息.

5. 是否需要亲和纯化的抗体或 IgG 片段?使用亲和纯化的抗体或 IgG 片段的优点将取决于 预期的结合类型。亲和纯化的抗 体的非特异性结合量最低,而 IgG 片段包含高亲和抗体。事 实上,在亲和纯化中, 高亲和力抗体保持固定在基质上并且不能被洗脱。 

6.有必要使用 F(ab) F(ab)2片段抗体吗?F(ab) ) F(ab)2片段抗体消除了抗体 Fc

部分与细胞(如巨噬细胞、树突细胞、 中性粒细胞、NK 细胞和 B 细胞)上 Fc 受体之间的 非特异性结合,并且由于它 们尺寸较小而能够更有效地渗透组织。由于片段抗体不具有 Fc 部分,因此它们 不干扰抗 Fc 介导的抗体检测。

查看使用 F(ab) F(ab)2 片段抗体的优点 

7. 是否需要抗 IgG 重链和轻链、抗轻链或抗 F(ab)2 二抗?我们以不同形式提供二抗:

•抗 IgG 重链和轻链的抗体同时与 IgG 亚类的重链和轻链反应

•抗轻链抗体与在所有免疫球蛋白类中均相同的一抗轻链反应

•抗 F(ab)2 二抗与一抗的 F(ab)2 部分反应

 

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