一、产品概述
Gibco® AMNIOMAX™ II 完全羊水培养基（货号：A5557001）是专为中国市场设计的即用型、无菌液体培养基，优化用于羊水细胞的体外培养与扩增。该产品基于经典配方，添加必要的营养成分、生长因子及抗生素，可高效支持羊水细胞（如胎儿成纤维细胞、上皮细胞等）的贴壁生长、增殖与形态维持，适用于产前诊断中的细胞遗传学分析（如染色体核型分析）及相关研究应用。

二、产品组成
主要组成成分为抗生素（庆大霉素），L- 谷氨酰胺和胎牛血清。

三、医疗器械备案凭证编号
国械备20210210号

四、产品特性与优势
即用型设计：无需额外添加血清或添加剂，开箱后可直接使用，简化实验操作流程，减少人为误差；
高效细胞支持：优化配方促进羊水细胞快速贴壁（通常24-48小时内），显著提高细胞存活率与增殖速率，缩短培养周期；
严格质量控制：每批次产品均通过无菌性、内毒素、pH值、渗透压及细胞生长促进能力检测，确保批次间一致性与可靠性；
中国市场专供：符合中国相关法规要求，包装与说明书均适配国内使用场景，提供本地化支持。

五、预期用途
仅用于细胞增殖培养，不具备对细胞的选择、诱导、分化功能，培养后的细胞用于体外诊断。
本产品适用于人羊水细胞与绒毛样本的原代培养，培养后的细胞用于产前诊断测试。

六、储存与运输
–20°C至–5°C 避光储存，有效期为 18 个月。生产日期及失效日期见标签。运输条件：低于–5°C。

七、使用方法
该细胞培养基为冷冻提供，解冻后即可使用。可在2-8°C温度下解冻，然后轻轻旋转以确保均匀。请勿在 37°C 温度下解冻。否则可能形成沉淀，应避免。
注：AmnioMAX™ 培养基含有胎牛血清（FBS）；解冻和储存后，可能会产生絮状碎屑。
• 已解冻但未开封的细胞培养基可在标注有效期内在 2°C至 8°C的黑暗环境下保存最多两个月。
• 开封后，请在 7 到 10 天内使用可实现 AmnioMAX™ 产品的******生长性能。请避免反复加热/冷却或长时间暴露在光线下。
• 请勿在标签所注有效期外使用。

八、详细操作流程
（1）开始前准备
1.无菌地将全部内容物（15mL）AmnioMAX™-C100补充剂加入到90mLAmnioMAX™-C100基础培养基中。
2.轻轻旋转混合物，以确保均匀。
3.避光储存于2-8°C，直至使用。 不建议对AmnioMAX ™产品进行额外补充，添加Fungizone ™可能具有毒性。

（2）制备羊水样本用于培养
1.使用20mL注射器或试管采集羊水，该容器已获得细胞培养批准，然后在室温下保存样本直至处理。
2.轻轻翻转羊水样本的原始容器，使细胞重新悬浮。
3.将样品转移至锥形管（货号339651或339653)中，然后在室温下以100×g离心。
4.在顶部和底部均贴上35mm Nunc™ EasYDish™培养皿（货号150460)标签。使用镊子将无菌Nunc™ Thermanox™盖玻片（货号174985)放置于培养皿底部。
5.小心地避免干扰细胞沉淀，从离心机中取出锥形管。在生物安全柜中，从每个试管中移除上清液。保留~1毫升液体位于沉淀上方。
6. 将上清液转移至另一试管中，以保存用于未来的生化检测。
7.小心地抽吸每个沉淀物上方的任何剩余上清液，然后向每个待接种的培养物的沉淀中加入0.5 mL AmnioMAX™-II完全培养基。
8. 轻轻敲击试管侧壁以重新混悬沉淀，然后将细胞悬液均等分配到盖玻片中心。小心地将悬浮液限制在盖玻片上。
9. 在37°C和5%CO22的湿化培养箱中培养24至48小时。

（3）用AmnioMAX ™ -II完全培养基灌流细胞培养物
1.轻轻向培养皿中加入2mL预热的AmnioMAX ™-II完全培养基。
2.在37°C和5%CO22的湿化培养箱中培养两天。

（4）饲料培养物
1.在培养箱内，使用无菌的5 mL血清移液管从培养皿边缘移除培养基，以避免细胞受到干扰。
2.加入2mL预热的AmnioMAX ™-II完全培养基，然后将培养物 置于37°C和5%CO2的加湿培养箱中培养3天。

（5）用于中期染色体制备的收获细胞
1. 培养第5天开始，使用倒置显微镜定期检查菌落形成和细胞生长。每48至72小时更换培养基，直至观察到菌落。
2.当菌落形成明显时，向每个2mL盖玻片培养物中加入50µL的10mg/mL KaryoMAX™科赛霉素™溶液（货号15210040或货号15212012)，然后轻轻旋转培养皿以混合。
3.在37°C和5%CO22的加湿培养箱中孵育20分钟。
4.将培养皿从培养箱中取出，然后在培养皿内边缘周围轻轻加入~1mL低渗溶液（HBSS，货号14025092或PBS，货号10010023）。
5.让培养皿静置10-12分钟。从培养皿边缘吸出低渗溶液/培养基混合液。
6.加入2mL低渗溶液，然后让培养皿静置12分钟。
7.轻轻加入~1 mL新鲜的6：1甲醇/冰醋酸固定液，然后让培养皿静置12分钟。吸去培养皿边缘周围的固定液。
8.重复步骤7，使用新鲜的3：1固定液重复2-3次每次10分钟。
注：请勿去除最终固定剂。
9.用精细镊子将盖玻片从培养皿中取出，然后将盖玻片的边缘放在纸巾上以排出多余的固定剂。
10.将35毫米培养皿置于湿纸巾表面（为干燥过程创造湿润环境），然后将盖玻片的角落（细胞面朝上）抵住盖玻片。静置晾干2-3分钟。
11.将35毫米培养皿盖移至60°C的载玻片加热器上，然后将盖玻片（细胞面朝上）靠在盖玻片上。静置干燥~10分钟。
12.用革兰氏染色笔轻轻标记每个盖玻片的背面，然后将盖玻片细胞面朝上放置在60°C载玻片加热器上至少4小时，但不超过24小时。
13.使用标准配方和时间对盖玻片进行染色。
14.盖玻片染色并干燥后，分析中期染色体，然后解释结果。

（6）用吉姆萨染色剂染色
用酶和染色剂对染色体进行分带是识别正常和异常染色体结构的关键。
1.根据下表制备6个Coplin罐：

2.将载玻片置于含有胰蛋白酶/氯化钠混合液的罐中（罐1）内，放置规定时间。时间可以短至10秒或长至2分钟，具体取决于所用胰蛋白酶的活性水平。
3.胰蛋白酶作用时间结束后，取出载玻片，然后通过依次浸入0.9%氯化钠冲洗罐（罐2和3）进行冲洗。
4.将载玻片放入含有Gurr染色剂和缓冲液的染色罐（罐4）中，静置5分钟。时间可能因所用染色剂的强度不同而有所差异。
5.从罐中取出载玻片，然后依次浸入两个Gurr缓冲液冲洗罐（罐5和6）中进行冲洗。
6.从最后一次冲洗中取出载玻片，风干，然后用Cytoseal ™ 60覆盖载玻片。允许在烘箱（50°C）中干燥，之后就可以在显微镜下进行中期扫描了。

九、质量保证/控制
每批AmnioMAX ™-II完全培养基和AmnioMAX ™-C100完全培养基均需通过美国认证的参考细胞遗传学实验室进行性能测试，以确保始终如一的卓越性能。将混合的人羊水原代样本在AmnioMAX ™-II完全培养基或AmnioMAX ™-C100完全培养基中培养六天后，方可测量菌落数和有丝分裂菌落数。此外，每批产品需检测pH值和渗透压，并在批次放行前必须通过无菌测试。